녹아웃(KO) 마우스 | Cyagen Korea

현재 키메라 항원 수용체 T 세포 면역 요법(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy, CAR-T)은 혈액 종양 치료 분야에서 괄목할 만한 결과를 얻었습니다. 그러나 저분자 또는 항체 약물과 달리 CAR-T는 효능에 영향을 미칠 수 있는 많은 요인이 있는 '살아있는' 세포 약물이며 그 중 CAR 분자 구조가 핵심 요소입니다.

CAR 분자 구조는 종양 항원을 인식하는 항체 단일 가닥 가변 영역, 경첩 영역(hinge region), 세포 내 공동 자극 도메인 및 신호 전달 도메인을 포함합니다. 설계의 합리성은 CAR-T 세포의 사멸 효과, 생체 내 지속성 및 안전성에 영향을 미칩니다. 따라서 다양한 종양 치료 표적에 대해 합리적이고 효과적인 CAR 분자를 설계하고 후속 CAR-T 세포 구축을 위해 CAR 렌티바이러스로 패키징해야 합니다.

 

CAR 분자 설계가 너무 어렵다?

렌티바이러스의 패키징 효과가 좋지 않습니까?

바로 연락하기——바이러스 벡터 제작준비 플랫폼

모든 어려운 문제를 쉽게 해결합니다!

먼저 몇 가지 실험 사례를 보자

 

 

CD19 항원 렌티바이러스 패키징 및 역가 검출

CD19 항원을 발현하는 렌티바이러스 정제액을 구배 희석(0.01, 0.1, 1, 10μl)하고 동일한 수의 293T 세포에 첨가하고 72시간 후 293T 세포의 양성률을 유속으로 검출하였다. 그런 다음 공식에 따라 렌티바이러스의 형질도입 역가를 계산합니다.

 

A: 0.1μl 군의 양성 세포 비율을 나타낸다

B: 0.01μl 조의 양성 세포 비율

N: 바이러스를 추가 할 때 세포 수

V:A조에 추가된 바이러스 볼륨

 

 

 

그림 1. CD19 항원 렌티바이러스 역가 검출 결과

(데이터 출처: Cyagen)

 

그림과 같이 CD19 항원 양성 세포의 수는 바이러스 증가에 따라 점차 증가하고 있다. 렌티바이러스가 좋은 감염 활성을 가지며 위의 공식에 따라 계산된 바이러스 역가는 1.4×108 Tu/ml입니다.

 

 

CD19-293T 안정 발현 세포주 구축

성공적으로 제조된 상기 CD19 바이러스를 293T 세포로 형질감염시키고, 다중 스크리닝 후 양성률이 거의 100%인 CD19-293T 세포를 얻었으며, 양성률 테스트 결과는 아래 그림에 나와 있습니다.

 

 

그림 2 CD19-293T 안정 발현 세포주 양성률 검사 결과

(데이터 출처: Cyagen)

 

CD19-CAR 렌티바이러스 패키징 및 역가 검출

CD19 표적을 위해 설계된 2 세대 클래식 CAR 분자를 렌티 바이러스 벡터에 구축하고 CD19-CAR 렌티 바이러스를 패키징했습니다. 위의 방법으로 바이러스 역가를 검출하였으며, 계산 후 얻은 바이러스 역가는 4.33×108 Tu/ml이다.

 

 

그림 3 CD19 CAR 분자 구조, 여기서 VH 및 VL 서열은 CD19 항체 FMC63 클론에서 파생된다

 

 

 

그림 4 CD19 CAR 렌티바이러스 역가 검출 결과

(데이터 출처: Cyagen)

 

기타 렌티바이러스 감염

 

 

그림 5. 다른 세포 렌티바이러스 감염 효과도

 

 

 

2006 년에 설립된 Cyagen은 데이터, 알고리즘, 모델로 신약 개발을 가속화하는 혁신적인 CRO 기업으로, 동물 모델 맞춤화부터 유전자, 세포 치료 업무에 이르기까지 고객의 요구를 전방위적으로 충족합니다.
카톡 채널 팔로우 클릭
최신 동향을 파악
제품 업무 상담
전화:
86 20-31601779
이메일:
웹 사이트:
  • Contact Us

    영업일 기준 1-2일 내에 답변해 드리겠습니다.

    *

    The username is required

    *

    The user's email is required

    Please enter a valid email address.

    *

    The content is required

    *